'

Инновационный подход к получению Wnt-лигандов.

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

Николаева Ксения Магистрант МГУ(ПФ) Институт белка РАН, группа генетики развития Инновационный подход к получению Wnt-лигандов.


Слайд 1

Цель Создание технологии снижающей стоимость производства Wnt3а-лиганда.


Слайд 2

Введение Белки семейства Wnt являются лигандами Wnt/Frizzled сигнального каскада. Наиболее изученным из них является Wnt3a-лиганд.


Слайд 3

Wnt3а Wnt3а-лиганд- фактор роста, участвующий в клеточной пролиферации и дифференциации. Он применяется в регенерационной медицине и как агент для выращивания стволовых клеток. В ходе экспериментов нашей лаборатории было предположено и доказано, что белок Р0 стимулирует выработку Wnt3а-лиганда.


Слайд 4

Технология культивирования стволовых клеток на фидерном слое из мышиных фибробластов не позволяет вследствие иммунных реакций использовать клетки для введения в организм больного человека. Бесфидерное культивирование стволовых клеток позволяет избежать многих негативных эффектов. Необходимым компонентом данной технологии является Wnt3а-лиганд. Стволовые клетки человека растущие на фидерном слое фибробластов мыши.


Слайд 5

Трудности получения. Wnt-лиганды гидрофобны и плохо растворимы. Их получение с помощью бактериальных клеток невозможно вследствие сложных путей секреции и модификаций (липидных и углеводных). Эукариотические клетки выделяют Wnt-лиганды в очень малых количествах, в результате чего их получение чрезвычайно дорого.


Слайд 6

Почему оптимизация производства Wnt-лигандов актуальна? Цена из каталога R&D Systems


Слайд 7

На сегодня в России : Лицензии Росздравнадзора на осуществление забора и хранения клеточного материала (Банк стволовых клеток) имеют 10 учреждений: 1. ОАО "Институт Стволовых Клеток Человека" (Гемабанк)- Москва 2. ООО "Флора-мед" - Москва 3. ООО "Желдормфармтранс" (ассоциация "Мера-Мед") - Москва 4. ГУЗ Москвы "Банк стволовых клеток департамента здравоохранения г. Москвы" 5. ГУ Институт хирургии им. А.В. Вишневского РАМН - Москва 6. ООО "Криоцентр" - Москва 7. ГУП "Поволжский банк гемопоэтических клеток" - Самара 8. ЗАО "РеМеТэкс" - Москва 9. ООО "Бьюти Плаза" - Москва 10. ООО "Транс-Технологии" Санкт-Петербург. Enamine, Ltd – Киев, Украина Список опубликован во 2 номере журнала "Клеточная трансплантология и тканевая инженерия"


Слайд 8

Разработка Создание клеточной культуры с повышенной экспрессией гена P0 для получения Wnt3а-лиганда с меньшими финансовыми затратами. Клетки мышиных фибробластов линии L. Система была проверена на клетках мышиных фибробластов линии L. Получены предварительные результаты.


Слайд 9

Методика Клетки экспрессирующие Wnt3а Клетки гиперэкспрессирующие Wnt3а и Р0 Перенос среды содержащей Wnt3а Выращивание клеток, интенсивность флуоресценции которых связана с содержание Wnt3а в среде. Измерение флуоресценции клеток


Слайд 10

Содержание Wnt3а в среде. маркер День3 Wnt3a+P0 День3 Wnt3a День3 L-клетки День2 Wnt3a+P0 День2 Wnt3a+P0 День2 L-клетки День1 Wnt3a+P0 День1 Wnt3a День1 L-клетки L-клетки- контроль. Wnt3a-клетки, гиперэкспрессирующие дополнительный ген Wnt3a. Wnt3a+P0-клетки гиперэкспрессирующие дополнительный гены Wnt3a и P0.


Слайд 11

Интенсивность флуоресценции клеток. (активность Wnt3a) Стимуляция средой, полученной от клеток гиперэкспрессирующих Wnt3a+P0 Стимуляция средой, полученной от клеток гиперэкспрессирующих Wnt3a


Слайд 12

Сравнительная активность флуоресценции репортетных TOPdGFP-L клеток при стимуляции их средой. L-TOPdGFP + P0 Wnt3a medium + Wnt3a medium


Слайд 13

Перспективы Достичь большей экспрессии P0, и как следствие добиться повышения производства и активности Wnt3a-лиганда; Оптимизировать методы выделения и очистки Wnt3а-лиганда. 3) Масштабировать все процессы.


Слайд 14

Группа генетики развития


×

HTML:





Ссылка: