'

С.А. Попов зав. лабораторией микробиологии НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Москва, 12-05-2011

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

С.А. Попов зав. лабораторией микробиологии НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Москва, 12-05-2011 Использование иммунохроматографического экспресс-теста для идентификации микобактерий туберкулезного комплекса после выращивания на жидких и плотных питательных средах


Слайд 1

Туберкулез, г. Москва в/выявленные, всего в/выявленные, МБ+ активные ТБ, всего активные ТБ, МБ+ Основные эпидемиологические показатели, абс. значения Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 2


Слайд 2

Объемные показатели исследований, г. Москва, 2009 г. Посевов диагностических – 40 тыс. Посевов для контроля лечения – 62 тыс. Посевов ускоренной диагностики – 28 тыс. Выявляется культур МБ – 8,3 тыс. нуждаются в первичной идентификации – 8,3 тыс. нуждаются в видовой дифференциации 8,3 тыс. Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 3


Слайд 3

Этапы идентификации микобактерий туберкулеза Первичная идентификация (культуральные характеристики) длительность роста на средах; пигментообразование; морфология колоний; наличие кислотоустойчивой окраски; температура роста. Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 4


Слайд 4

Этапы идентификации микобактерий туберкулеза Дифференциация МБТ от НТМБ (биохимические и рост на селективных средах) способность продуцировать никотиновую кислоту (ниациновый тест); наличие нитратредуктазы; наличие термостабильной каталазы; рост на среде с натрием салициловокислым; рост на среде с пара-нитробензойной кислотой; рост на среде с хлоридом натрия. Исключения: M.simae, M.gastri, M.marinum, M.terrae Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 5


Слайд 5

Колонии микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена 6


Слайд 6

Систематическое положение микобактерий и проблемы идентификации МБТ На 2008 г описано более 120 видов микобактерий, из них 7 относятся к комплексу видов M.tuberculosis Порядок Actinomycetales Семейство Mycobacteriaceae Род Mycobacterium Основные проблемы идентификации МБТ: Классические методы – длительность (30 дн.) Молекулярно генетические – трудозатратность (3-4 дн.) Иммунологические – низкая специфичность (<75-80%) Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 7


Слайд 7

Клинические аспекты идентификации Идентификация микобактерий туберкулеза (28 дней) сдерживает передачу результатов ускоренных методов диагностики лекарственной устойчивости МБТ Бактек-960 общей производительностью 8 тыс. иссл./год Средняя длительность тестов на ЛЧ 7-9 дней Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 8


Слайд 8

Фундаментальные исследования МБТ Из 33 специфических белков, отличается тем, что секретируется во внешнюю среду, являясь индикатором роста М.tuberculosis. Белок MPT64 - предоминантный белок, массой 24 kDa, обладает иммуногенным свойством. Предложен как потенциальный кандидат состава вакцины, (распознается T-лимфоцитами CD4+). позволили выявить видоспеци-фичный белок AgMPT64 Карта генома М.tuberculosis H37Rv, Nature, 1998 Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 9


Слайд 9

Микро-ммунохроматографический тест Конъюгат: конъюгат коллоидного золота и мышиных моноклональных антител к МРТ64 (0,24±0,048 мкг); Тестовая полоса (Т): мышиные моноклональные антитела к МРТ64 (0,32±0,064 мкг) Контрольная полоса (С) : антитела козы к иммуноглобулинам G мыши (0,64±0,128 мкг) Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 10


Слайд 10

Процедура проведения теста Р Е З У Л Ь Т А Т Колония с плотной среды 100 мкл буфера Перемешать Конденсат с среды (Агар) 100 мкл буфера Жидкая среда 100 мкл взвеси жидкой среды МБТ НТМБ Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 11


Слайд 11

Список проверенных видов НТМБ Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 12


Слайд 12

Бактерии 68 видов 137 штаммов Грибы 8 видов 15 штаммов Нетуберкулезные МБ 40 видов 57 штаммов 51 клин. культур Список проверенных видов микроорганизмов Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 13


Слайд 13

Аналитическая чувствительность теста SD MPT64 штаммы МБТ и M.bovis в различных разведениях относительно Ст.мутн.№5 (5*108 микр. тел) Результат реакции – интенсивность окраски в баллах от 1+ до 3+ = 1*105 КОЕ/мл, при снятии с плотной питательной среды ЛЙ Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 14


Слайд 14

Аналитическая чувствительность теста SD MPT64 штаммы МБТ и BCG с разной длительностью культивирования после индикации роста в системе Бактек-960 в баллах окраски 5*106 микр. тел/мл, жидкая питательная среда MGIT, Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 15


Слайд 15

Диагностическая чувствительность теста, чистая культура МБТ, плотные п/среды Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 16


Слайд 16

Диагностическая специфичность метода, чистые культур НТМБ, плотные п/среды 1,2M.avium, 1,2M.kansasii, 1M.flei, 1M.scrofulaceum, 1,2M.fortuitum, 1M.simae, 1,2M.intracellularae, Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 17


Слайд 17

Диагностическая чувствительность метода, культуры МБТ, среда MGIT Бактек-960 * Недостаточное время дополнительного культивирования Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 18


Слайд 18

Диагностическая специфичность метода, культуры НТМБ, среда MGIT Бактек-960 1,2M.avium, 1,2M.kansasii, 1M.flei, 1M.scrofulaceum, 1,2M.fortuitum, 1M.simae, 1,2M.intracellularae, Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 19


Слайд 19

Диагностика МБТ в различных материалах Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 20


Слайд 20

Экспресс-идентификация культур МБТ: микроиммунохроматография vs PNB/NaS/ПЦР Косы МБТ, ZNх400 МБ - ?, ZNх1000, жидкая питательная среда Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 21


Слайд 21

Рекомендации по дифференциации видов МБТ/НТМБ мокрота мокрота Культура МБ Культура МБ «На глаз» /ПЦР/ культуральный тест Алгоритм определения комплекса видов МБТ МБТ НТМБ МБТ НТМБ Доступно Точно Быстро Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 22


Слайд 22

Что это дает…? Снижение лабораторной нагрузки: Времязатраты на каждый тест снижается с 40 мин. лаб. времени до 3-5 мин. Сокращение длительности идентификации с 28 дней до 10 (!) мин. Реализация преимуществ ускоренных автоматизированных методов (Бактек-технологии) Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 23


Слайд 23

Спасибо за внимание! Попов Сергей Александрович 495-681-02-33 Popov_s55@mail.ru Попов СА НИИ фтизиопульмонологии Первый МГМУ ИМ Сеченова, Москва, 2011 24


×

HTML:





Ссылка: