'

Изучение влияния метки коллоидного золота на способность антител взаимодействовать с вирусом на примере Х-вируса картофеля (ХВК) и вируса табачной мозаики (ВТМ)

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

Изучение влияния метки коллоидного золота на способность антител взаимодействовать с вирусом на примере Х-вируса картофеля (ХВК) и вируса табачной мозаики (ВТМ) Матузенко Светлана Работа проводилась в Институте биохимии им. А.Н. Баха РАН, в лаборатории иммунобиохимии. Научный руководитель: Сафенкова Ирина Викторовна Москва, 2009 г.


Слайд 1

Целью исследования было изучение влияния метки коллоидного золота на способность антител взаимодействовать с вирусом на примере Х-вируса картофеля (ХВК) и вируса табачной мозаики (ВТМ).


Слайд 2

Задачи: Изучить взаимодействие вирусов с нативными препаратами антител. Изучить взаимодействие вирусов и конъюгатов антител с коллоидным золотом. Охарактеризовать изменения взаимодействия антител с вирусами при их иммобилизации на поверхности коллоидного золота.


Слайд 3

Гипотеза Иммобилизация антител на коллоидном золоте происходит преимущественно по участкам их поверхностей, не входящим в антиген-связывающие сайты. Поэтому антитела при иммобилизации не теряют функциональности. Общий план строения антител: 1) Fab; 2) Fc; 3) тяжелая цепь; 4) легкая цепь; 5) антиген-связывающий участок; 6) шарнирный участок


Слайд 4

В работе использовались Х-вирус картофеля (ХВК) Вирус табачной мозаики (ВТМ) Моноклональные антитела против ХВК и ВТМ Коллоидное золото Конъюгат коллоидного золота с антителами Конъюгат антивидовых антител с пероксидазой хрена. Метод иммуноферментного анализа (ИФА) Метод электронной микроскопии Метод атомно-силовой микроскопии Метод иммуно-хроматографического анализа.


Слайд 5

Проверка взаимодействия немодифицированных антител с вирусами с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) Схематическое изображение образования иммунных комплексов при проведении ИФА: 1 – лунка, 2 – вирус, 3 – конъюгат антитела с пероксидазой хрена, 4 – антитело Фотография микропланшета


Слайд 6

Концентрационная зависимость взаимодействия антител с иммобилизованным ВТМ в системе ИФА


Слайд 7

Выводы по ИФА взаимодействия моноклональных антител с ВТМ Количество иммунных комплексов, регистрируемых методом ИФА, зависит от концентрации и антител и вируса, что позволяет проводить выбор антител, наиболее эффективно взаимодействующих с вирусом. Из трех охарактеризованных антител против ВТМ для дальнейшей работы было выбрано 3G11, связывание которого регистрируется в концентрации до 20 нг/мл.


Слайд 8

Получение и характеристика коллоидного золота Гистограмма распределения частиц по диаметру Электронно-микроскопическая фотография препарата коллоидного золота 3D-изображение препарата коллоидного золота (атомно-силовая микроскопия)


Слайд 9

Получение конъюгатов коллоидного золота с антителами. Диализ антител Определение концентрации антител по оптической плотности при длине волны 280 нм Определение оптимальной концентрации антител для получения стабильных неагрегирующих конъюгатов с КЗ Синтез конъюгатов Спектрофотометри-ческая характеристика конъюгата Схематическое изображение конъюгата коллоидного золота (2) с антителами (1)


Слайд 10

Проверка работы конъюгата с помощью иммунохроматографического анализа


Слайд 11

Проверка взаимодействия вирусов и конъюгатов антител методом ИФА Схематическое изображение образования иммунных комплексов: 1 – лунка, 2 – вирус, 3 – антитела, 4 – частица коллоидного золота, 5 – конъюгат антивидовых антител с пероксидазой хрена.


Слайд 12

ИФА взаимодействия ВТМ и немодифицированных антител ИФА взаимодействия ВТМ и конъюгатов коллоидного золота с антителами Сравнение взаимодействия с ВТМ немодифицированных антител и конъюгатов коллоидного золота с антителами


Слайд 13

Вывод Антитела, специфичные к вирусам (ХВК и ВТМ), не теряют функциональности при иммобилизации на частицах коллоидного золота. При этом уровень связывания в системе ИФА выше для конъюгированных с коллоидным золотом антител, чем для немодифицированных антител в той же концентрации. Таким образом, наша гипотеза полностью подтвердилась.


Слайд 14

Используемая литература Вершигора А.Е. Общая иммунология. // К.: Выща шк. 1989. С. 101. Галактионов В.Г. Иммунология. // М.: Нива России. 2000. С. 48-74. Feinstein A., Rove A.J. Molecular mechanism of formation of an antigen-antibody complex. // Nature. 1965. V. 4967. P. 147-149. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. // М.: Высш. шк. 1991. С. 20-25. Антитела. Ред. Кэтти Д., М.: Мир. 1991. Т. 1. С. 11-30, 39, 105-111. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ.- М.: Мир, 2002. С. 210-222 Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука, 1983. С. 124-127. Дзантиев Б.Б., Жердев А.В., Романенко О.Г., Титова Н.А., Трубачева Ж.Н., Чередникова Т.В., Еремин С.А. Твердофазные методы иммуноферментного определения гербицидов симазина и атразина. Прикладная биохимия и микробиология. 1995 т. 31, N 1, сс. 134-139.


Слайд 15

Благодарности Я благодарю сотрудников лаборатории иммунобиохимии Института биохимии им. А.Н. Баха, в частности моего научного руководителя, Ирину Викторовну Сафенкову, за помощь в работе, а так же Сергея Менделевича Глаголева за организацию биопрактики.


Слайд 16

Имунноферментный анализ Первый столбец лунок оставлен под контроль, а в остальные добавлено по 100 мкл раствора вируса в ФБ (фосфатный буфер) (для каждой – по две строки). Первый столбец был оставлен под контроль, в следующие раститрованы антитела (по три столбца на каждое антитело) 3G11, 3G1, 2C12. В последние два столбца ничего не добавляли.


Слайд 17

(рН 8,5) IgG-11G (mg/ml) = [(A(280)*10]/1,4= [0,091*10]/1,4 = 0,65 mg/ml


Слайд 18

Имунноферментный анализ (8,5 и 9,5 – значения pH конъюгатов) (20 и 30 – размер частиц коллоидного золота)


×

HTML:





Ссылка: