'

ДНК диагностика фитопатогенов

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

ДНК диагностика фитопатогенов


Слайд 1

Методы диагностики Визуальный Индикаторные растения Электронная микроскопия Серологическая диагностика ДНК диагностика


Слайд 2

ДНК диагностика Полимеразная цепная реакция – ПЦР Традиционная ПЦР ПЦР в реальном времени Детекция после ПЦР (end-point detection) Биочипы


Слайд 3

ДНК диагностика Сбор материала Экстракция нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) Постановка полимеразной цепной реакции (ПЦР) Регистрация сигнала Обработка результатов


Слайд 4

Полимеразная цепная реакция – ПЦР После проведения реакции из одной молекулы ДНК образуется миллионы идентичных копий


Слайд 5

ДНК диагностика Диагностика урогенитальных инфекций (хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, кандидоз и др.). Вирусные заболевания (гепатиты В и С, вирус папилломы человека, ВИЧ). Детекция микобактерий туберкулеза. Изучение экспрессии генов в различных тканях Анализ SNPs. Детекция трансгенов. Применение в селекции растений. Детекция фитопатогенов.


Слайд 6

Детекция фитопатогенов Контроль безвирусного посадочного материала Детекция вироидов Детекция фитоплазм Детекция вирусов в насекомых-переносчиках


Слайд 7

Используется с 1995 г.


Слайд 8

Диагностика должна быть: Быстрой Дешевой Точной Чувствительной Широко применимой Воспроизводимой


Слайд 9

Подходы к диагностике Одновременный анализ большого количества образцов на один фитопатоген Анализ в одном образце большого числа фитопатогенов


Слайд 10

Традиционная ПЦР Быстрота анализа. Высокая точность. Воспроизводимость. Простота, легкость в применении.


Слайд 11

Недостатки традиционной ПЦР Длительность. Высокий риск контаминации. Высокие затраты при массовых анализах. Ядовитые реагенты (EtBr). ТРУДОЕМКОСТЬ


Слайд 12

Молекулярные беконы – структура шпильки. TaqMan-зонды – линейные зонды (Roche Diagnostics). «Скорпион»-зонды – структура шпильки и билинейная (Invitrogen). ПЦР в реальном времени


Слайд 13

Молекулярный бекон (Molecular Beacon).


Слайд 14

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ БЕКОНЫ


Слайд 15

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ БЕКОНЫ


Слайд 16

TaqMan-зонд - в процессе проведения ПЦР происходит освобождение флуоресцентной метки ДНК-зонд гибридизуется с амплифицируемой последовательностью ДНК-зонд в процессе амплификации разрушается ДНК-полимеразой и метка начинает флуоресцировать


Слайд 17

«СКОРПИОН»-ЗОНДЫ


Слайд 18

Сравнение технологий


Слайд 19

Используя разные флуоресцентные метки можно детектировать в пробирке разные ПЦР продукты


Слайд 20

Детекция флюоресценции Детекция в режиме реального времени (Real-time PCR) Детекция после ПЦР (end-point detection)


Слайд 21

Детекция флюоресценции Real-time PCR End-point detection


Слайд 22

Преимущества ПЦР в реальном времени: - все операции проводятся в одной пробирке; - исключается риск контаминации ПЦР-смеси и продуктов; - быстрота анализа; - возможность автоматизации; - экономия затрат времени и труда.


Слайд 23

Преимущества ПЦР в реальном времени: Чувствительность В 10000 раз более чувствительнее чем ELISA В 100 раз более чувствительнее чем обычный ПЦР


Слайд 24

Детекция вироида веретеновидности клубней картофеля PSTVd


Слайд 25

Детекция вироида веретеновидности клубней картофеля PSTVd кДНК РНК ОТ-ПЦР Real-time PCR или End-point detection


Слайд 26

Детекция картофельного вироида PSTVd


Слайд 27

Детекция картофельного вироида PSTVd


Слайд 28

Детекция картофельного вироида PSTVd


Слайд 29

Детекция вирусов X и Y картофеля Детекция вируса Y Детекция вируса Х


Слайд 30

Детекция вирусов картофеля Сокращение времени детекции в 2 раза Детекция вируса Х картофеля с помощью Real-time ПЦР


Слайд 31

Диагностикумы Картофель: Вирусы Х и Y, вирус скручивания листьев картофеля, вироид веретеновидности клубней картофеля Земляника: вирус кольцевого пожелтения жилок листа, вирус крапчатости листьев, вирус слабого краевого пожелтения листа, вирус морщинистости листьев земляники, микоплазмы; Огурец: Вирус огуречной мозаики, вирус зеленой крапчатой мозаики.


Слайд 32

Возможность использования в полевых условиях


Слайд 33

Возможность использования в полевых условиях Экстракция ДНК ПЦР


Слайд 34

Биочипы Возможность одновременно детекции более 30000 мишеней


Слайд 35


Слайд 36

Центр молекулярной биотехнологии


×

HTML:





Ссылка: