Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто»

Слайд 0

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто» Лункин В.В., Поляшова Т.И. НПФ «МЕДИКОМЕД»

Слайд 1

Действие активных форм кислорода (АФК) на клетки и ткани Доза АФК Low High Выживаемость Гибель Апоптоз Некроз Задержка роста и старение Митогенетическое и пролиферативное действие Воздействие активных форм кислорода в высоких концентрациях на клетки и ткани приводит к их повреждению и гибели, что является причиной многих заболеваний. АФК в низких дозах способствуют выживаемости

Слайд 2

Слайд 3

D A N G E R Chemicals Radiation Microbial and virus infection Free radicals ROS DNA damage Carcinogenesis Endogenic Exogenic ? Oxygen radicals scavengers

Слайд 4

Предпосылки работы. Природные соединения и их композиции являются потенциальными экзогенными «ловушками» АФК и других свободных радикалов и требуют научного анализа для их практического применения. Задача работы состояла в исследовании антиоксидантной активности препарата «Тигровый глаз – орто» на экспериментальных моделях in vitro: нефракционированной крови человека, изолированных гранулоцитах крови человека, ферментативной бесклеточной среде.

Слайд 5

Объект и Метод Работа проведена на клетках периферической нефракционированной крови, изолированных гранулоцитах человека и на модели ферментативной реакции Интенсивность генерации АФК была оценена по люминол-зависимой хемилюминесценции с использованием хемилюминометра ХЕМИЛЮМ-12, который позволяет проводить измерения одновременно в 12 образцах. Прибор разработан в Лаборатории клеточной нейробиологии Института биофизики клетки РАН.

Слайд 6

ХЕМИЛЮМ-12Хемилюминометр роторный 12-ячеечный ХЕМИЛЮМ-12 работает с пробами объемом от 0,1 до 0,3 мл, помещаемыми одновременно в 12 ячеек. В процессе регистрации на экране монитора выстраиваются 12 графиков; через каждые 2,5 секунды на каждом из них ставится очередная точка. Одновременная регистрация хемилюминесценции от 12 проб позволяет получить серию измерений с использованием минимального количества исследуемого материала. Высокая чувствительность при стабильном уровне нуля, возможность регистрировать быстрые изменения хемилюминесценции, - все это при большом числе одновременно анализируемых проб малого объема - главные отличительные черты прибора.

Слайд 7

Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» дозозависимо понижал уровень продукции активных форм кислорода (АФК) в цельной крови человека. Высокий уровень АФК в крови является опасным и высокореактивным повреждающим фактором для клеток и тканей организма. Проявление антиоксидантных свойств препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» в цельной крови человека

Слайд 8

Нейтрофил - полиморфноядерный  нейтрофильный гранулоцит Фагоцитоз Дегрануляция Респираторный взрыв Фагоцитоз зимозана нейтрофилом (с любезного разрешения Dr. K.B.Pryzwansky) 5 мкм 1 – прикрепление частицы зимозана; 2 – образование псевдоподии вокруг зимозана; 3 - поглощение

Слайд 9

Респираторный взрыв 2NADPH + 4O2 = 2NADP+ + 4O2- + 2H+ 0,5-1 nmol/мин/106 клеток Повышенная утилизация глюкозы Усиленное потребление О2 Активация гексозомонофосфатного пути Усиленная продукция активных форм кислорода Активированная продукция АФК Спонтанный уровень продукции АФК

Слайд 10

Реактивные формы кислорода HOCl 1O2 OH· H2O2 O2-· NO2· SOD O2-· O2 O2 H2O2 H2O H2O Fe2+ Fe3+ NO MPO OONO- HOONO H2O + Cl- nitrogen dioxide radical peroxynitrite anion nitric oxide hydrogen peroxide hydroxyl radical singlet oxygen hypochlorus acid superoxide anion radical

Слайд 11

Антиоксидантные свойства препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» дозозависимо понижает высокий уровень спонтанной продукции АФК изолированными нейтрофилами человека Клетки были инкубированы с ТГ-орто в возрастающих концентрациях в течение 30 мин при 37оС

Слайд 12

Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека Препарат ТГ-орто дозозависимо подавляет развитие респираторного взрыва в изолированных гранулоцитах. Клетки были инкубированы с ТГ-орто в различных разведениях при 37оС в течение 30 мин, затем активированы 1 мкМ N-формил-Met-Leu-Phe, чтобы вызвать респираторный взрыв.

Слайд 13

Клетки были инкубированы с ТГ-орто в различных разведениях при 37оС в течение 30 мин, затем активированы 50 мкМ N-формил-Met-Leu-Phe, чтобы вызвать респираторный взрыв. Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека Препарат ТГ-орто дозозависимо изменяет способность гранулоцитов продуцировать активные формы кислорода .

Слайд 14

PDK Участники передачи сигнала от рецептора fMLF Рецептор fMLF Gi Shc Grb2 SOS GAP ras raf MAPK каскад PI3K PKB/Akt PI3P PLC Ca2+ DAG PKC PA PLD PA-AK Кальмодулин Ca2+-CK

Слайд 15

Сигнальные пути, активируемые окислительным стрессом HSF1 C-Jun NF-kB STAT PLC?1 PKC PI3K PKB JAK ERK JNK p38 Gene expression changes p53 Активные Формы Кислорода (on J.L. Martindale & N.J. Holbrook, 2002, J.Cell.Physiol.) DNA-PK

Слайд 16

Оценка антиоксидантной активности препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» на модели супероксид-анион продуцирующей ферментативной реакции Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» дозозависимо ингибирует генерацию АФК в ферментативной бесклеточной реакции «ксантин – ксантиноксидаза». В реакции «ксантин – ксантиноксидаза» продуцируется супероксид-анион радикал Препарат

Слайд 17

Выводы: Антиоксидантная активность препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» проявляется в цельной крови, на изолированных клетках и в ферментативной реакции. Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» обладает высокой антиоксидантной активностью в дозах, достигаемых при его разведении более чем в 100000 раз. Антиоксидантное действие исследуемого препарата направлено на супероксид-анион радикал, который является исходной формой активных интермедиатов кислорода. Предполагается, что применение препарата может быть полезным при заболеваниях, сопровождающихся дисфункцией фагоцитов, связанной с избыточной нерегулируемой продукцией АФК.

Слайд 18

Работа выполнена совместно с сотрудниками Лаборатории клеточной нейробиологии Института Биофизики клетки Российской Академии Наук г. Пущино Благодарности Сафронова В.Г. Мальцева В.Н. Кротова Л.М. Санталов Б.Ф.