'

ИММУНОЧИПЫ – НОВЫЙ ФОРМАТ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

ИММУНОЧИПЫ – НОВЫЙ ФОРМАТ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Пудова Л.А., Кирдяшкина Н.П., Гоптарь И.А., Судьина А.С., Андрюшина Т.А., Шипулин Г.А. ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора


Слайд 1

Разработка тест-систем в формате иммуночипа для диагностики инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний Почему формат иммуночипа?


Слайд 2

ИФА Иммуночип ИФА vs


Слайд 3

+ Иммуноблот + Иммуночип VS Иммуноблот


Слайд 4

Технологии не для каждой лаборатории Evidence (RANDOX) BioPlex (BIO-RAD)


Слайд 5

В основу современного алгоритма серологической диагностики заложена необходимость проведения повторного тестирования для верификации результатов анализа


Слайд 6

+ = Иммуночип – одноэтапный тест для выявления большого числа значимых биологических маркеров заболеваний, высокая информативность, возможность сочетания скрининга и подтверждения в одном формате сопоставимый (или >) по чувствительности с ИФА, а по специфичности с иммуноблотом


Слайд 7

Принципиальное отличие биочипов – возможность выявления в одном анализе множества маркеров 15 Цитокинов


Слайд 8

Аллергочип ImmunoCAP ISAC IgE Общее время проведения реакции на чипе – около 5 часов Минимальное количество образца – 20 мкл на 103 аллергена Простота постановки


Слайд 9


Слайд 10

Новая технология бесконтактной микропечати с помощью современных наноплоттеров Позволяют печатать на слайды или дно лунок планшетов


Слайд 11

1 чип (слайд) = 1 образец 1 слайд = 16 образцов, 16 Х 4 = 64 образца 1 планшет = 96 образцов


Слайд 12

Эррей – лунка планшета Флуоресцентный профиль эррея на альдегидном слайде Иммуносорбенты для планарных чипов высокой плотности – активированные микроскопные слайды и полистироловые планшеты


Слайд 13

КАНАЛ Cy5 (антитела IgG) КАНАЛ Cy3 (антитела IgM) Детекция антител разных классов в одной постановке в одном эррее


Слайд 14

Себестоимость анализа при использовании разных серологических методов Число анализируемых инфекций (количество маркеров на одну инфекцию = 5)


Слайд 15

Принципы размещения антигенов и антител на одном иммуночипе


Слайд 16

Схема проведения анализа с помощью иммуночипа Разведение сывороток Инкубация с образцом, 370С Детекция Отмывка Отмывка Инкубация c коньюгатом, 370С


Слайд 17

ТЕСТ-СИСТЕМЫ В ФОРМАТЕ ИММУНОЧИПОВ, РАЗРАБАТЫВАЕМЫЕ В ЦНИИЭ


Слайд 18

+ - Дизайн эррея иммуночипа для серодиагностики Лайм-боррелиоза


Слайд 19

Чувствительность и специфичность иммуночипа для cеродиагностики ИКБ (клинический материал предоставлен и охарактеризован клиническими базами: МОНИКИ, НИИР РАМН, Центрами санэпиднадзора - г. Ижевск, г.Киров, г.Ярославль, г. С.-Петербург)


Слайд 20

Сравнительное изучение выявления специфических антител в сыворотках крови больных ИКБ в различных тест-системах (процент выявления антител, ограниченная выборка клинического материала, n=42) %


Слайд 21

Изучение дискордантных образцов в иммуноблоте на наличие антител класса М


Слайд 22

Rickettsia F.tularensis Инфекции передаваемые клещами рода Ixodes


Слайд 23

Иммуночип для выявления cпектра трепонемоспецифических и реагиновых антител классов G и M, ассоциированных с сифилисом


Слайд 24

Результаты изучения чувствительности и специфичности иммуночипа для диагностики сифилиса


Слайд 25

Иммуночип для серодиагностики TORCH-инфекций Одновременное выявление антител разных классов при использовании смеси конъюгатов (анти-IgG, - IgM, - IgA), меченых флуорофорами, отличающимися по спектральным характеристикам) Одновременное выявление антител к разным инфекциям на одном стекле 1 иммуночип на комплекс TORCH = 16 ИФА-тест-систем


Слайд 26

Дизайн одного эррея для серологической диагностики TORCH-инфекций


Слайд 27

Флуоресцентная детекция спектра антител разных классов: IgG и IgM конъюгат анти-IgM человека-Сy3 конъюгат анти-IgM человека-Сy3 + Канал Cy3 Канал Сy5 + - + -


Слайд 28

Совпадение результатов, полученных в иммуночипе, с данными ИФА при тестировании сывороток (всего- 700 шт)


Слайд 29

Определение значимых маркеров к ВИЧ 1 и 2 типов, ВГС, сифилису Канал внутреннего контроля - FITC Канал учета специфической реакции – Сy5 gp120, gp160, gp41, pol, gag, env(ВИЧ2), AТ p24, сore, NS3, NS4, NS5, Tp47, Tp17, Tp15, TmpA, IgG, анти-IgG, буфер


Слайд 30

Оценка чувствительности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис» (n = 1290 образцов)


Слайд 31

Оценка специфичности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис» (n = 678 образцов)


Слайд 32

Иммуночип для детекции ООИ ( B.anthracis, Y.pestis) для B.anthracis для детекции Y.pestis Аb SA26 Ab IgG F1 К - BSA-Cy5 К - (ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности РФ“) Один эррей


Слайд 33

Примеры флуоресцентных паттернов. Аналитическая чувствительность Y.pestis B. anthracis 10 3 cells/ml 10 7 cells/ml 10 4 cells/ml 10 5 cells/ml 10 6 cells/ml 10 3 cells/ml 10 4 cells/ml 10 5 cells/ml 10 6 cells/ml 10 7 cells/ml


Слайд 34

ДНК-чип для детекции B.anthracis, Y.pestis, F.tularensis pagA Bacilus anthracis Yersinia pestis Francisella tularensis CapA capB IglBC FopA RD1 mVin pla caf1 caf1 caf2 Ypo 0394 Ypo 0397 Printing buffer


Слайд 35

Схема анализа с помощью ДНК-чипа Выделение ДНК из материала ПЦР-амплификация последовательность промотора T7-RNA полимеразы включена в структуру обратных праймеров Транскрипция (15-30 мин) Гибридизация на DНК-чипе (30 мин) Детекция положительных сигналов на чипе с использованием стрепатавидин-Cy5 (15-20 мин) Сканирование и анализ результатов пробо- подготовка on-chip анализ


Слайд 36

Примеры флуоресцентных паттернов после гибридизации на ДНК-чипе B.a. mix Y.p. mix F.t. mix B.a.+ Y.p + F.t. mix Штамм B. anthracis F.tularensis штамм Y.pestis антиген Праймеры Материал


Слайд 37

                                                                                                                                                                                         Наши планы Регистрация тест-систем для серодиагностики TORCH, cифилиса, трансфузионных инфекций, боррелиоза. Разработка программы для обсчета результатов и формирования клинического отчета, удобного для врача-лаборанта. Организация производства биочипов. Взаимодействие с клиническими базами. 5 ……..


Слайд 38

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!


×

HTML:





Ссылка: