'

Исследование тканеспецифичности энхансерной активности LTR HERV-K Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Лаборатория структуры и функции генов человека. Руководитель: к.б.н., с.н.с. Акопов С.Б.

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

Исследование тканеспецифичности энхансерной активности LTR HERV-K Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Лаборатория структуры и функции генов человека. Руководитель: к.б.н., с.н.с. Акопов С.Б.


Слайд 1

Свойства ретровирусов Вирионы ретровирусов окружены липопротеидной оболочкой. Геном представлен двумя однонитевыми нефрагментированными молекулами РНК. Репликация имеет две уникальные черты: а) с помощью вирус-специфичного фермента обратной транскиптазы осуществляется перевод РНК в ДНК форму, б) новосинтезированная ДНК интегрирует в геном инфицированной клетки.


Слайд 2

U3 R U5 U3 R U5 gag pol env 8. Транспорт РНК 7. Процессинг РНК 6. Транскрипция LTR LTR Cap (A)n Геномная РНК вируса Cap (A)n Сплайсированная РНК Белки 9. Трансляция 10.Сборка вируса 3. Освобождение РНК 4. Обратная транскрипция 5. Интеграция Вирус 11. Выход из клетки Вирус (вирусоподобная частица) 2. Проникновение в клетку 1. Взаимодействие с рецептором Схема жизненного цикла ретровирусов


Слайд 3

Структура LTR


Слайд 4

Образование одиночных LTR в геноме U3 R U5 U3 R U5 gag pol env LTR LTR Рекомбинация Транскрипция Одиночный LTR


Слайд 5

Потенциальная роль HERV в патогенезе Индукция геномной нестабильности Активация или инактивация генов, вовлечённых в регуляцию клеточного цикла Продуцирование иммуносупреcсивных факторов Изменение нормальной регуляторной функции HERV Scand. J. Immunol. 48, 329-338,1998


Слайд 6

Задачи Наработать и проверить векторные конструкции. Методом транзиентной экспрессии репортерного гена люциферазы измерить энхансерную активность полноразмерного и частично делетированного LTR в различных линиях клеток. Статистически обработать полученные результаты. Оценить тканеспецифичность экспрессии полноразмерного и частично делетированного LTR. Сравнить активность полноразмерного и частично делетированного LTR в исследованных линиях клеток. Исследование тканеспецифичности энхансерной активности LTR HERV-K


Слайд 7

Расположение LTR L47334 на хромосоме 19 человека Z N F 1 3 4 Z N F Z N F ACUTE LYMPHOBLASTIC LEUKEMIA LYMPHOID LEUKEMIA LEUKEMIA HEMOLYTIC ANEMIA MALIGNANT HYPERTHERMIA MYOTONIC DYSTROPHY Pr1 Pr2 33bp 23bp 923bp


Слайд 8

R Транскрипция TATAA AATAGGAGACTCCATTTTG AATAAA Участок связывания белков ERF и YY1 Промотор Сигнал полиаденилирования Структура LTR HERV-K U3 U5 Негативный регулятор R TATAA AATAGGAGACTCCATTTTG AATAAA U3 Полноразмерный LTR LTR с делецией негативного регулятора


Слайд 9

Схема исследования энхансерной активности LTR HERV-K с использованием системы экспрессии репортерного гена или Клонирование в репортерный вектор, лишенный энхансера. Трансфекция ДНК в клетки млекопитающих Измерение активности люциферазы ПЦР-амплификация LTR


Слайд 10

Использованные плазмиды


Слайд 11

Использованные плазмиды


Слайд 12

Контрольная плазмида


Слайд 13


Слайд 14


Слайд 15

Результаты


Слайд 16

Результаты


Слайд 17

Результаты


Слайд 18

Выводы Показано наличие энхансерной активности LTR, принадлежащего семейству HERV-K (HML-2), в клеточной линии тератокарциномы Tera-1. Обнаружена зависимость эффективности энхансера от клеточной линии, то есть его тканеспецифичность. Показано, что активность энхансера SV40 для линий NT2/D1, Tera-1, HeLa, NGP-127, CHO-K1 значительно превышает активность в линиях Jurkat, HL-60, 293. Показано, что делеция сайленсер-подобного элемента в U5 области LTR HERV-K не влияет на энхансерную активность этого LTR.


×

HTML:





Ссылка: