'

Характеристика гена целлюлазы Pectobacterium carotovorum

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Биологический факультет Кафедра молекулярной биологии Характеристика гена целлюлазы Pectobacterium carotovorum Шарай О.А. Научный руководитель: доцент Николайчик Е.А. , Ph. D.


Слайд 1

Pectobacterium carotovorum Бактерии Pectobacterium carotovorum наносят значительный ущерб растениям картофеля, вызывая заболевание «черная ножка» (заболевание, приводящее к гибели растения вскоре после прорастания клубней), а также мягкую гниль клубней при хранении.


Слайд 2

Основными факторами вирулентности для Pectobacterium считаются: внеклеточные пектатлиазы внеклеточные целлюлазы внеклеточные протеазы


Слайд 3

Предполагается, что целлюлаза является одним из основных факторов вирулентности Pectobacterium carotovorum. Молекулы целлюлазы состоят из субстратсвязывающего домена на С-конце, соединенного с помощью короткого полилинкерного участка с каталитическим доменом на N-конце. Ген целлюлазы celV кодирует эндоглюконазу семейства 5 Целлюлаза – фактор вирулентности Pectobacterium carotovorum


Слайд 4

Цель работы: создание мутанта Pectobacterium carotovorum 3-2 по гену целлюлазы (celV) и оценка роли этого гена в вирулентности бактерий Pca.


Слайд 5

Схема получения мутантного штамма P. carotovorum по гену celV ‘celV’


Слайд 6

Создание мутанта Pectobacterium carotovorum 3-2 по гену целлюлазы (celV) Чашечный тест на продукцию секретируемой целлюлазы клетками штамма Pca JN42 (сектор 1) и его мутантов BA1 (сектор 2), BA2 (сектор 3), ВА3 (сектор 4). Электрофореграмма продуктов амплификации хромосомной ДНК штаммов Pca BA1 (дорожки 1 и 5), BA2 (дорожки 2 и 6), ВА3 (дорожки 3 и 7) с использованием праймеров сel1, cel2 и M13/pUC sequencing primer (дорожки 1-3) или сel1, cel2 и M13/pUC reverse sequencing primer (дорожки 5-7) при температуре отжига 50°С. Дорожка 4 - ДНК-маркер (Fermentas#SM0311).


Слайд 7

Проверка вирулентности штаммов, мутантных по гену целлюлазы, при заражении клубней картофеля Среднее значение веса мацерированной ткани клубней картофеля сортов Скарб и Живица, зараженных бактериями штаммов Pca JN42, BA1, BA2 и BA3.


Слайд 8

Проверка вирулентности штаммов, мутантных по гену целлюлазы, при заражении стеблей картофеля Оценка симптомов поражения «черной ножкой» стеблей картофеля сорта Дельфин 0 - нет симптомов заболевания 1 - минимальное поражение 2 - выраженное поражение внутренних тканей 3 - поражение внутренних тканей стебля и небольшое поверхностное потемнение 4- сильное поражение тканей стебля, но не по всему диаметру междоузлия 5 - «черная ножка»: поражены все ткани междоузлия, интенсивная черная окраска, стебель высыхает, его верхняя часть выше места инокуляции поникает


Слайд 9

Выводы Введение суицидной плазмиды с фрагментом гена целлюлазы celV в клетки Pectobacterium carotovorum 3-2 привело к инактивации хромосомной копии этого гена. У клеток клонов P. carotovorum 3-2 с инактивацией гена celV целлюлазная активность использованными методами не детектируется. Инактивация гена celV не оказывает существенного влияния на способность бактерий P. carotovorum 3-2 инфицировать клубни картофеля. Инактивация гена celV у бактерий P. carotovorum 3-2 не оказывает существенного влияния на развитие симптомов «черной ножки» при заражении стеблей картофеля.


Слайд 10

Спасибо за внимание!


×

HTML:





Ссылка: