'

Влияние РНК-интерференции на экспрессию гена AML1-ETO

Понравилась презентация – покажи это...





Слайд 0

Влияние РНК-интерференции на экспрессию гена AML1-ETO Д. В. Посредник научный руководитель В. В. Гринев Белорусский государственный университет кафедра генетики


Слайд 1

Цель: оценка эффективности подавления экспрессии гибридного гена aml1-eto с помощью РНК-интерференции в клетках ОМЛ линий Kasumi-1 и SKNO-1.


Слайд 2

Задачи: Оценить эффективность подавления экспрессии гибридного гена aml1-eto в клетках ОМЛ линий Kasumi-1 и SKNO-1 с помощью РНК-интерференции, запускаемой кшРНК. Синтезировать и клонировать последовательность, кодирующую искусственные анти-AML1-ETO микроРНК. Разработать челночный плазмидный вектор pDsRed1/amiAML1-ETO, кодирующий искусственные анти-AML1-ETO микроРНК, и изучить его функциональную активность. Оценить эффективность подавления экспрессии гибридного гена aml1-eto в клетках ОМЛ линий Kasumi-1 и SKNO-1 с помощью РНК-интерференции, запускаемой искусственными анти-AML1-ETO микроРНК.


Слайд 3

Основные понятия: РНК-интерференция — это механизм подавления экспрессии гена, то есть проявления данного гена в организме в форме определенного признака на стадии трансляции. МикроРНК — класс некодирующих РНК, которые имеют длину около 22 нуклеотидов. Эти РНК играют важную роль в регуляции трансляции и деградации мРНК. кшРНК – то же, что и микроРНК, но внеклеточного происхождения, то есть, не кодируются геномом клетки и не проходят процессинг в ядре.


Слайд 4

Схема строения лентивирусных векторов доставки pHR’SINcPPT-SEW (А) и pHR-shAML1/ETO (Б). А) Б)


Слайд 5

Эффективность трансдукции клеток линий Kasumi-1 (А) и SKNO-1 (Б) VSV-G псевдотипированным лентивирусом, основанным на векторе рHR-shAML1/ETO. Б)


Слайд 6

Искусственное подавление белка AML1-ETO с помощью anti-AML1-ETO коротких интерферирующих РНК в клетках острого миелоидного лейкоза линий Kasumi-1 (А) и SKNO-1 (Б).


Слайд 7

F_AML1-ETO ?BamHI? ?перекрывающаяся область? 5’-ATGGATCCAGTGAGCGCACCTCGAAATCGAATACTGAGAAGGGTGAAGCCACAGATG-3’ R_AML1-ETO ? SalI ? ?перекрывающаяся область? 5'-GTCGTCGACAGTAGGCAAACCTCGAAATCGTACTGAGAAGACATCTGTGGCTTCACCCT-3' Б) а) Сиквенс олигонуклеотидов и их вторичная структура, рассчитанная с помощью программного пакета Mfold 3.2 ([Na+] = 60 mM, [Mg2+] = 1.5 mM и +37oC).


Слайд 8

Карта челночного плазмидного вектора pDsRed1-С1.


Слайд 9

А) Б) Вторичные структуры DsRed1 mRNA (А) и DsRed1/AML1-ETO mRNA (Б), рассчитанные с помощью программного пакета Mfold Б)


Слайд 10

Результаты котрансфекции челночными плазмидными векторами pDsRed1-C1, pDsRed1/amiAML1-ETO и pEGFP-C1 клеток линии 293Т НЕК


Слайд 11


Слайд 12


Слайд 13

A) Б) Схема строения лентивирусных векторов доставки pHR-CMV-DRep (A) и pHR-CMV-DRep/amiAML1-ETO (Б)


Слайд 14

Эффективность трансдукции клеток линий Kasumi-1 и SKNO-1 DRep/Control/v.01 и pHR-DRep/amiAML1-ETO/v.01 VSV-G-псевдотипированными лентивирусами.


Слайд 15

Стабильность наследования лентивирусных векторов DRep/Control/v.01 и pHR-DRep/amiAML1-ETO/v.01 в клетках линий Kasumi-1 и SKNO-1, интегрировавшихся в геном.


Слайд 16


Слайд 17

Выводы были озвучены по ходу доклада.


Слайд 18

автор благодарен С.В. Глушену за помощь в проведении микроскопических исследований И.Н. Северину за помощь в проведении цитометрических исследований D. Trono за предоставленные вектора pCMV_dR8.91 и pMD2.G M. Scherr за базовый лентивирусный вектор доставки pHR-SINcPPT-SIEW O. Heidenreich за векторы pHR’SINcPPT-SEW и pHR-shAML1/ETO сотрудникам лаборатории клеточной и молекулярной биологии лейкозов за помощь в проведениях исследований


Слайд 19

Спасибо за внимание. вернуться к началу презентации


×

HTML:





Ссылка: